Verbeter de herprogrammering van fibroblasten, bekomen uit volwassen huidweefsel, naar functionele levercellen via gerichte evolutie van hepatocyt nucleaire factoren (FWOSB54)

Grote aantallen functionele menselijke hepatocyten zijn vereist voor zowel biomedisch onderzoek als farmaceutische toepassingen. Recente onderzoeken hebben aangetoond dat de ectopische expressie van hepatische herprogrammeringsfactoren leidt tot de directe omzetting van menselijke volwassen huidafgeleide fibroblasten in geïnduceerde hepatocytachtige cellen (iHeps). Hoewel er in de loop van de jaren aanzienlijke vooruitgang is geboekt, blijven de gerapporteerde conversie-efficiënties en leverfunctionaliteit van de verkregen iHeps laag. Om dit probleem op te lossen, stellen we voor om gerichte eiwitevolutie-instrumenten te gebruiken om de herprogrammeringsprestaties van hepatocyten nucleaire factoren (HNF) drastisch te verbeteren. Gerichte eiwittechnologie is een technologieplatform dat de evolutie met meer dan zes ordes van grootte versnelt en de functionaliteit van eiwitten aanpast aan specifieke toepassingen. In een darwiniaan
evolution spirit, verwachten we dat het toepassen van selectiedruk het mogelijk zal maken om HNF's (eHNF's) te evolueren naar ongekende herprogrammeringsprestaties, in staat om iHeps te genereren met superieure leverfunctie. We zullen ons richten op specifieke domeinen die betrokken zijn bij dimerisatie, DNA-binding en
coactivator interacties en identificeer kandidaat-eHNF's op basis van high-throughput fenotypische uitlezingen van succesvolle hepatische conversie en genotypering door amplicon-sequencing. We zullen de prestaties van geselecteerde eHNF-iHeps in vitro en in een immuun deficiënt muizenleverziektemodel betwisten.

Trefwoorden:Fibroblasten

Disciplines:Celgroei en -ontwikkeling