Het onthullen van nieuwe factoren in de vroege humane embryonale ontwikkeling

Een beter inzicht in hoe verschillende celtypes ontstaan uit het pre-implantatie embryo is noodzakelijk voor de ontwikkeling van betere fertiliteitsbehandelingen en een beter begrijpen van congenitale aandoeningen. Recent hebben we gen-regulatorische netwerken geïdentificeerd tijdens een kritische fase in de zwangerschap, de ontwikkeling van het menselijke pre-implantatie embryo. Deze analyse identificeerde zowel gekende als nieuwe factoren in het pre-implantatie embryo. Desalniettemin zijn vele van deze factoren niet eerder bestudeerd in deze context. Op basis van deze analyse, veronderstellen we dat voorspelde factoren tot expressie komen in specifieke toekomstige populaties van de pluripotente epiblast en belangrijk zijn voor de verdere embryonale ontwikkeling. Met behulp van immunofluorescentie microscopie zullen we daarom de proteïne expressie en bijdrage van deze factoren aan het toekomstige lot van celpopulaties nagaan. We zullen de expressie van voorspelde pluripotentie factoren functioneel manipuleren in humaan naïeve geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPS), die model staan voor het pre-implantatie embryo. We zullen CRISPR/Cas9 genoombewerking en RNA sequencen van individuele cellen combineren. Hiermee zullen we het effect van deleties van voorspelde factoren nagaan op het transcriptoom en gen-regulatorische netwerken. Ten slotte, zullen we nagaan of de overexpressie van voorspelde factoren het reprogrammeren van somatische cellen tot iPS cellen zal verbeteren.