Histologisch en gen expressie profiel van spieren van kinderen met cerebrale parese en de impact van Botulinum toxine behandeling

Cerebrale parese, veroorzaakt door een niet-progressief letsel in het ontwikkelende brein, is de belangrijkste oorzaak van invaliditeit bij kinderen. Het wordt in de eerste plaats gekenmerkt door neurale stoornissen en in de tweede plaats door musculoskeletale problemen die met de leeftijd toenemen. De meeste behandelingen voor kinderen met cerebrale parese zijn gericht op de spier, maar deze worden belemmerd doordat er onvoldoende kennis is over het histologisch en gen expressie profiel van de spier veranderingen die bij deze kinderen, vooral op jonge leeftijd, worden waargenomen. Bovendien bestaat er geen databank van de microscopische eigenschappen (vezelgrootte en proportie) van groeiende gezonde kinderen die kan dienen als referentiewaarden voor de vergelijking met CP kinderen. Recent is er bezorgdheid gerezen dat de intramusculaire botulinetoxine type A injecties, de eerstelijnsbehandeling voor de focale spasticiteit bij kinderen met cerebrale parese, het spiervolume en de kwaliteit zou aantasten. In dit project zullen we ten eerste focussen op het gen expressie profiel en de histologische beoordelingen van de spier met specifieke focus op spiergroei, extracellulaire matrix componenten en neuromusculaire junctie bij kinderen met cerebrale parese op verschillende leeftijden en bij leeftijd-gepaarde gezonde kinderen. Verder zullen de potentiële relaties tussen deze data en de macroscopische spierveranderingen (spiervolume en oppervlakte van de dwarsdoorsnede) en neuromusculaire symptomen (spasticiteit) onderzocht worden met als doel specifieke CP fenotypen op te stellen. Verder zullen de histologische data van de gezonde kinderen gebruikt worden om een database te creëren voor de referentiedata. Ten tweede zal het tijdsverloop van de spierveranderingen na botulinetoxine type A injecties gevolgd worden in eenzelfde CP kind terwijl het gen expressie en histologische profiel bepaald wordt. Deze data worden vergeleken met de gezonde leeftijd-gepaarde kinderen. Spierstalen van twee verschillende spieren zullen verzameld worden bij CP en gezonde kinderen met behulp van de sonografisch geleide percutane naald microbiopsie techniek. Het doctoraatsproject omvat het verzamelen en behandelen van de spierbiopsies, het verfijnen van de protocollen, het uitvoeren van de analyse van de spierstalen en het interpreteren van de resultaten in relatie tot de klinische symptomen. De metingen omvatten: 1) Histologische kleuring met immunofluorescentie op spierstaal en kwantificering met een fluorescentiemicroscoop; 2) Gen- en eiwitexpressie op spierhomogenaat met behulp van algemene moleculairbiologische technieken (RNA- en eiwitextractie, RT2 PCR profiler arrays, qRT-PCR, western blot, eiwitassays).