< Terug naar vorige pagina

Project

Evaluatie van de toxiciteit van afbraakproducten met behulp van zebravis en geavanceerde LC-MS-technieken

Om de toxiciteit van de afbraakproducten die tijdens verschillende eAOP-behandelingen worden gevormd te onderzoeken, zullen zebravis larven met een leeftijd van 3 dagen na de bevruchting worden blootgesteld aan monsters die voor, tijdens en na eAOP-behandeling worden verzameld. Zebravis is een nieuw en veelbelovend klein diermodel voor toxiciteitsstudies. De kracht van dit in vivo model ligt in de hoge genetische, fysiologische en farmacologische homologie met de mens. Hun hoge fecunditeit, optische helderheid en kleine omvang maken het bovendien mogelijk om tests uit te voeren met een middelmatige tot hoge throughput met behulp van microgram hoeveelheden van de verbinding. Op deze manier wordt een uniek systeem verkregen dat de throughput van in vitro technieken (nodig om het grote aantal monsters dat in dit project zal worden gegenereerd te screenen) combineert met de bio-relevantie van het hele dier. Zebravis zal eerst worden blootgesteld aan het volledige monster dat voor, tijdens of na de eAOP-behandeling wordt verkregen. Wanneer toxiciteit wordt waargenomen, zullen de verbindingen die verantwoordelijk zijn voor de toxische effecten worden gescheiden en geïdentificeerd met behulp van geavanceerde LC-MS technieken. Vanwege de verwachte complexiteit van de monsters zal het potentieel van multidimensionale LC in combinatie met quadrupool time-of-flight MS voor dit doel worden geëvalueerd. Zodra potentieel toxische verbindingen zijn geïdentificeerd, zullen deze verbindingen worden gezuiverd met behulp van (preparatieve) chromatografie en zullen zebravisjes afzonderlijk worden blootgesteld aan deze verbindingen om hun toxiciteit te bevestigen. 10 larven per monster worden na de behandeling 24 en 48 uur live gescreend op letaliteit of toxiciteitsverschijnselen, zoals oedeem, verminderde circulatie, verandering van de hartslag, bloedingen, weefselnecrose, verminderde motiliteit (verminderde of afwezige aanrakingsrespons), lichaamskromming, zwemblaas- en kaakafwijkingen. Deze beoordeling zal worden uitgevoerd door visuele observatie van behandelde larven met behulp van een standaard lichtstereomicroscoop. Wanneer toxiciteit wordt waargenomen, zal een meer specifieke, orgaangerelateerde beoordeling van de toxiciteit worden gemaakt met behulp van verschillende transgene zebravislijnen. Op deze manier zullen verbindingen worden gescreend op hepato-, cardio- en neurotoxiciteit via high-throughput gedragstests, celbeeldvorming en 2D-beeldgebaseerde morfometrische analyse.

Datum:6 jan 2020  →  Heden
Trefwoorden:Liquid chromatography, Mass spectrometry, Zebrafish, Toxicity, Wastewater analysis
Disciplines:Analytische scheidings- en detectietechnieken
Project type:PhD project