Druppel-gebaseerde microfluïdica en nucleïnezuur engineering voor de ontwikkeling van een CRISPR-gebaseerde toolbox voor celvisualisatie

Fluorescentie-in-situhybridisatie (FISH) is de standaardmethode voor DNA visualisatie in cellen, maar vergt langdurige experimentele werkprocessen en genomisch DNA denaturatie. Anderzijds heeft de CRISPR-Cas9 (staat voor: Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Sequences and associated protein 9) technologie specifieke celvisualisatie, zonder nood aan DNA denaturatie, mogelijk gemaakt. Nochtans, alle tot dusver gerapporteerde CRISPR-Cas9-gebaseerde technologieën vereisen complexe engineering en leveren niet de verhoogde signaalamplificatie die noodzakelijk is voor sensitieve detectie. In dit project zullen we de sterkte van microfluïdica en nucleïnezuur engineering gebruiken om nieuwe tools te ontwikkelen die cruciaal zijn voor specifieke, sensitieve, en multiplex celbeeldvorming. Om dit doel te bereiken, zullen we (1) een hoge-doorvoer druppel-gebaseerd microfluïdisch platform ontwikkelen voor (2) het geheel innovatief en hoog-combinatorisch engineeren van een repertoire aan CRISPR-dCas9 tools die (3) zullen worden toegediend aan gefixeerde cellen voor proof-of-concept multiplex celbeeldvorming. Deze nieuwe CRISPR-dCas9 toolbox zal gecombineerd worden met transcriptoomanalyse, zijnde integraal voor het beantwoorden van verscheidene biomedische onderzoeksvragen in embryogenese, veroudering en ziekte.