< Terug naar vorige pagina

Project

In vitro studies naar het mechanisme waarmee LRP4 en sclerostin the Wnt signaaltransductie pathway reguleren.

Voorafgaand functioneel en genetisch onderzoek heeft aangetoond dat de canonieke Wnt signaaltransductie cascade een belangrijke pathway is in de regulatie van de botaanmaak. De pathway wordt geactiveerd door de binding van een Wnt ligand ter hoogte van het receptor complex dat wordt gevormd door een Frizzled receptor en een LRP5/6 co-receptor. Daarnaast hebben verschillende studies aangetoond dat sclerostin een belangrijke inhibitor van de pathway is. Sclerostin kan de pathway inhiberen door te binden ter hoogte van de LRP5/6 co-receptor en waardoor de activatie van de pathway door Wnt liganden wordt verhinderd. Naast LRP5/6 kan sclerostin ook interageren met LRP4. Verschillende studies hebben reeds aangetoond dat deze interactie belangrijk is voor de inhiberende functie van sclerostin, maar het downstream mechanisme van de LRP4-sclerostin interactie is tot nu toe nog niet onderzocht. In de literatuur is reeds beschreven dat de intracellulaire regio van LRP4 een endocytose signaal bevat. Daarnaast heeft voorgaand onderzoek aangetoond dat sclerostin in muriene mesenchymale stamcellen wordt geïnternaliseerd door middel van clathrine afhankelijke endocytose. Bijgevolg is onze hypothese dat sclerostin na interactie met LRP4 en LRP5/6 co-receptor wordt geïnternaliseerd. In deze studie gaan we deze hypothese verder onderzoeken door gebruikt te maken van primaire osteoblasten geïsoleerd uit de lange beenderen van wild type en Lrp4 mutante muizen. De primaire osteoblasten worden behandelend met fluorescent gelabeld sclerostin. Vervolgens zullen we met behulp van fluorescentie microscopie en western blot nagaan of het fluorescent gelabeld sclerostin in de osteoblasten is opgenomen zoals reeds eerder beschreven. Om de rol van LRP4/5/6 en de verschillende domeinen van de receptoren tijdens de internalisatie verder te onderzoeken, wordt de internalisatie van fluorescent gelabeld sclerostin onderzocht na overexpressing van wild type en mutant LRP4/5/6. Met dit onderzoek zullen we het inzicht in het mechanisme waarbij sclerostin na interactie met LRP4 en LRP5/6 de canonieke pathway reguleert vergroten. Deze kennis is van groot belang aangezien sclerostin een belangrijk target is voor de behandeling van osteoporose en andere botaandoeningen.
Datum:1 apr 2019 →  30 mrt 2020
Trefwoorden:WNT ROUTE, OSTEOBLASTEN, BOTVORMING, ENDOCYTOSE
Disciplines:Cellulaire signaaltransmissie, Genetica